Вестерн-Блот анализ

Данный метод, впервые описанный Товбином и соавторами [Towbin et al., 1979] использовали для идентификации АТФ-зависимого К+-транспортирующего белка с м.м. 55 кДа в различных тканях животных.

На первом этапе проводили фракционирование МХ с помощью SDS-PAAG электрофореза [Laemmli, 1979]. Нагрузка составляла 5 мкг суммарного белка. Электрофорез вели при комнатной температуре и постоянном токе (20-30 мА на пластину) в течение 3-4 часов до достижения бромфеноловым синим нижнего фронта геля.

После электрофореза половину геля окрашивали Кумасси R-250 или серебрением [Shevchenko et al., 1996], а вторую половину уравновешивали в буфере для блоттинга (150 мМ глицина, 20 мМ Триса, 0.02 % ДСН, 20 % метанол, рН 8.3) в течение 30 минут на качалке при комнатной температуре. Затем гель покрывали нитроцеллюлозной мембраной (Sigma, диаметр пор 0.45 мкм) и помещали между листами влажной фильтровальной бумаги. Систему помещали между двумя пористыми прокладками и зажимали между двумя пластинами из плексигласа. Перенос вели при напряженности 7 В/см2 в течение двух часов при комнатной температуре. После окончания переноса нитроцеллозную мембрану инкубировали в течение 30 минут в ПБС-Твин буфере при комнатной температуре. Дальнейшая процедура такая же, как в п.п. 5.2.1.


Рекомендуем к прочтению:

Род эмерицелла – Emericella
Второй крупный род эуроциевых с конидиальной стадией Aspergillus — эмерицелла (Emericella) — объединяет 13 видов. Они имеют шаровидные, довольно крупные клейстотеций (300-400 мкм в диаметре), обычно ярко-желтые, окруженные массой крупных ...

Зелёные водоросли - одноклеточные, колониальные и многоклеточные
Зелёные водоросли (Chlorophyta) - отдел (тип) низших растений, характеризующихся зелёной окраской в связи с преобладанием в их клетках Хлорофилла. Зелёные водоросли содержат те же пигменты, что и высшие растения (хлорофиллы а и в, каротин ...

Список сокращений
АТФ – аденозинтрифосфат АДФ – аденозиндифосфат АМФ – аденозинмонофосфат Ацетил-СоА – ацетилкофермент А Гл-1-ф – глюкозо-1-фосфат Гл-6-ф – глюкозо-6-фосфат КрФ – креатинфосфат МПК – максимальное потребление кислорода ПАНО – порог а ...