Получение плазмид

Страница 2

Все системы клонирования должны отвечать двум основным требованиям:

1) наличию нескольких сайтов для клонирования;

2) возможности достаточно простой идентификации клеток с рекомбинантными ДНК.

Для всех рутинных процедур молекулярного клонирования широко используется E.coli в качестве клетки-хозяина. Клетки, способные поглощать чужеродную ДНК, называются компетентными; компетентность E.coli повышают, используя специальные условия культивирования. Для получения больших количеств чужеродных белков с помощью рекомбинантных штаммов E.coli была сконструирована плазмида, содержащая сильный промотор, селективный маркерный ген и короткий участок с несколькими уникальными сайтами для рестрицирующих ферментов – полиленкер.

Эффективными методами трансформации E.coli плазмидами является электропорация (воздействие на клеточные мембраны электрическим током для увеличения их проницаемости). Для введения клонированных генов в соматические клетки также применяют микроинъекции и микроукалывания или слияние с клеткой нагруженных ДНК мембранных везикул (липосом).

Рекомендуем к прочтению:

Гликолиз, его энергетический эффект и биологическое значение.
Гликолиз [3-5] – это процесс расщепления углеводов (гл. обр. глюкозы) в отсутствии кислорода под действием ферментов. Конечный продукт гликолиза в клетках животных – молочная (или масляная) кислота. В растительных клетках конечным продукт ...

Семейство Пакарановые (Dinomyidae)
Вид ПАКАРАНА занесён в международную Красную Книгу ПАКАРАНА (Dinomys branickii) единственный вид, выделяемый в семейство, напоминает паку. Длина тела ее около 70 см, хвоста—20 см. На ногах по 4 пальца. Мех ее темно-коричневый с белыми шт ...

Семейство Гребнемышиные (Ctenomyidae)
Тело цилиндрическое, массивное с большой головой на короткой шее. Длина 17-25 см. хвост около 8 см., масса 200-900 гр. Глаза маленькие наружное ухо почти редуцировано. Окраска коричневато-серая. У самки 3 пары сосков. Характерны большие р ...