Получение плазмидСтраница 2
Все системы клонирования должны отвечать двум основным требованиям:
1) наличию нескольких сайтов для клонирования;
2) возможности достаточно простой идентификации клеток с рекомбинантными ДНК.
Для всех рутинных процедур молекулярного клонирования широко используется E.coli в качестве клетки-хозяина. Клетки, способные поглощать чужеродную ДНК, называются компетентными; компетентность E.coli повышают, используя специальные условия культивирования. Для получения больших количеств чужеродных белков с помощью рекомбинантных штаммов E.coli была сконструирована плазмида, содержащая сильный промотор, селективный маркерный ген и короткий участок с несколькими уникальными сайтами для рестрицирующих ферментов – полиленкер.
Эффективными методами трансформации E.coli плазмидами является электропорация (воздействие на клеточные мембраны электрическим током для увеличения их проницаемости). Для введения клонированных генов в соматические клетки также применяют микроинъекции и микроукалывания или слияние с клеткой нагруженных ДНК мембранных везикул (липосом).
Рекомендуем к прочтению:
Механизм мышечного сокращения
Для его понимания необходимо ознакомиться с молекулярной организацией миофибрилл – органелл, специализированных на сокращении. Это длинные тяжи, образующие продольные пучки по тысяче и более миофибрилл, которые почти полностью заполняют ц ...
Семейство Тушканчиковые (Dipodidae)
Семейство тушканчиковых объединяет небольшую группу грызунов, населяющих степи, полупустыни и пустыни юга Палеарктики и приспособившихся к специфическим и суровым условиям обитания в этих ландшафтах. Тушканчики — грызуны от средних до оче ...
Семейство Нутриевые (Capromyidae)
Семейство нутриевые или хутиевые. Древнее обособленное семейство, представители которого напоминают громадных крыс, массой в несколько килограммов. По своему строению, однако, эти животные далеки от настоящих крыс и имеют некоторое родств ...