Ферменты-рестриктазы и рестрикция ДНК
Страница 2

Генная инженерия » Ферменты-рестриктазы и рестрикция ДНК

Результативность электрофореза очень высока, поскольку с его помощью могут быть разделены фрагменты, размеры которых составляют от 2 до 50 000 оснований.

После электрофореза фрагменты из агарозы выделяют с помощью разных методов. На основании результатов сравнения размеров рестриктов одной и той же ДНК, полученных с помощью разных рестриктаз, строят рестрикционные карты, на которых показывают сайты рестрикции каждой из использованных рестриктаз В практическом плане рестрикционные карты позволяют определять не только размеры рестриктов, но и выяснять расположение в молекулах ДНК локусов тех или иных генов.

Поскольку у высших организмов в ходе транскрипции синтезируется гетерогенная ДНК, корректируемая процессингом, то в генной инженерии обычно используют комплементарную ДНК (кДНК), которую получают при использовании в качестве матрицы мРНК, на которой обратная транскриптаза синтезирует одноцепочечную ДНК (кДНК), являющуюся копией мРНК. В последующем эти одноцепочечные ДНК превращают в двухцепочечные ДНК. Считают, что кДНК содержит непрерывные нуклеотидные последовательности (транскрибируемые и транслируемые). Именно кДНК используют для рестрикции.

Выделенные после электрофореза из агарозных гелей фрагменты ДНК (рестрикты) можно предварительно подвергнуть секвени-рованию, т. е. определить в них нуклеотидную последовательность. Для этого используют химический и ферментативный методы сек-венирования.

Химический метод основан на получении меченных радиоактивным фосфором (32р) фрагментов и удалении из этих фрагментов одного из оснований с последующим учетом результатов радиоавтографии гелей, содержащих эти фрагменты. Ферментативный метод основан на том, что в конец анализируемого фрагмента вводят нуклеотид, используемый затем в синтезе разных фрагментов in vitro, анализируемых на нуклеотидную последовательность электрофоретически. Для изучения специфических последовательностей нуклеотидов в молекуле ДНК используют также гибридизацию ДНК-ДНК, РНК-РНК, ДНК-РНК, Нозерн- и Саузерн-блоттинги.

Страницы: 1 2 


Рекомендуем к прочтению:

Семейство Древеснодикобразовые (Erethizontidae)
В это семейство объединены средние и крупные грызуны, покрытые короткими, острыми иглами. Они внешне сходны с настоящими дикобразами, но никогда не имеют таких сильно удлиненных игл на задней части спины. Зубов — 20. В четыре рода объедин ...

Что понимают под окислительным фосфорилированием? Каково значение этого процесса для организма?
Окислительное фосфорилирование [3-5] – это осуществляющийся в живых клетках синтез молекул аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) из аденозиндифосфорной (АДФ) и фосфорной кислот за счёт энергии окисления молекул органических кислот, образующи ...

Симпатический отдел автономной нервной системы, его центральная и периферическая части
Симпатическая часть вегетативной нервной системы — часть вегетативной нервной системы. Центральный отдел симпатической части располагается в боковых рогах спинного мозга. От него отходят волокна, иннервирующие непроизвольные мышцы внутрен ...