Выделение ДНК

Генная инженерия » Выделение ДНК

Рассмотрим методику выделения ДНК на примере ДНК плазмид. ДНК из плазмидосодержащих бактериальных клеток выделяют с помощью традиционной техники, заключающейся в получении клеточных экстрактов в присутствии детергентов и последующем удалении из экстрактов белков фенольной экстракцией Полная очистка плазмидной ДНК от белков, РНК и других соединений проводится в несколько стадий. После того как клетки разрушены, например, с помощью лизоцима (растворены их стенки), к экстракту добавляют детергент, чтобы растворить мембраны и инактивировать некоторые белки. Большинство хромосомной ДНК удаляют из получаемых препаратов обычным центрифугированием.

Часто для полной очистки используют хроматографию. Если требуется очень тщательная очистка, используют высокоскоростное центрифугирование в градиенте плотности CsCI с использованием этидия бромида. Оставшаяся хромосомная ДНК будет фрагментирована в линейную, тогда как плазмидная ДНК останется ковалентно закрытой. Поскольку этидий бромид менее плотен, чем ДНК, то при ультрацентрифугировании в центрифужной пробирке будет «выкручиваться» два кольца — плазмидная ДНК и хромосомная ДНК Плазмидную ДНК отбирают для дальнейшей работы, хромосомную ДНК выбрасывают.


Рекомендуем к прочтению:

Вступление
Дыхательная система человека — совокупность органов, обеспечивающих в организме человека внешнее дыхание, или обмен газов между кровью и внешней средой и ряд других функций. Газообмен выполняется лёгкими, и в норме направлен на поглощени ...

Наука как процесс познания.
Наука - это сфера человеческой деятельности, представ­ляющая собой рациональный способ познания мира, в кото­рой вырабатываются и теоретически систематизируются зна­ния о действительности, основанные на эмпирической про­верке и математич ...

Семейство Крысиношиншилловые (Abrocamidae)
Длина тела у представителей этого семейства около 20 см., хвоста 15 см. Мех коричневато-серый, на груди небольшое желтовато-белое пятно. Глаза и уши большие. Передние лапы с 4 пальцами, задние с 5. Самка имеет 4 соска. КРЫСА ШИНШИЛЛОВАЯ ...