Выделение ДНК

Генная инженерия » Выделение ДНК

Рассмотрим методику выделения ДНК на примере ДНК плазмид. ДНК из плазмидосодержащих бактериальных клеток выделяют с помощью традиционной техники, заключающейся в получении клеточных экстрактов в присутствии детергентов и последующем удалении из экстрактов белков фенольной экстракцией Полная очистка плазмидной ДНК от белков, РНК и других соединений проводится в несколько стадий. После того как клетки разрушены, например, с помощью лизоцима (растворены их стенки), к экстракту добавляют детергент, чтобы растворить мембраны и инактивировать некоторые белки. Большинство хромосомной ДНК удаляют из получаемых препаратов обычным центрифугированием.

Часто для полной очистки используют хроматографию. Если требуется очень тщательная очистка, используют высокоскоростное центрифугирование в градиенте плотности CsCI с использованием этидия бромида. Оставшаяся хромосомная ДНК будет фрагментирована в линейную, тогда как плазмидная ДНК останется ковалентно закрытой. Поскольку этидий бромид менее плотен, чем ДНК, то при ультрацентрифугировании в центрифужной пробирке будет «выкручиваться» два кольца — плазмидная ДНК и хромосомная ДНК Плазмидную ДНК отбирают для дальнейшей работы, хромосомную ДНК выбрасывают.


Рекомендуем к прочтению:

Как сохранить витамины
Витамины широко распространены в природе, но они очень нестойки. Витамины Blt B2, С растворяются в воде, окисляются на воздухе и быстро разрушаются при нагревании. Кипятить овощи долго не следует, при варке лучше заливать их кипятком и за ...

Семейство Долгоноговые(Pedetidae)
Единственный вид, выделенный в это семейство. Внешне зверек очень напоминает миниатюрного кенгуру или гигантского тушканчика (ростом с зайца). Местное название долгонога означает «заяц-прыгун». Волосяной покров на спине долгонога серовато ...

Левитация - парящие йоги
В мифологии Востока отличительная черта богов - это способность летать. Но и простые смертные владели уникальным искусством. В Индии, например, им обладали брахманы, йоги, святые отшельники, маги и факиры . В индийских Ведах, что в буква ...