Введение

Генную инженерию составляет совокупность различных экспериментальных приемов (методик), обеспечивающих конструкцию (реконструкцию) и клонирование молекул ДНК (генов) с заданными целями.

Методы генной инженерии используют в определенной последовательности, причем различают несколько стадий в выполнении типичного генно-инженерного эксперимента, направленного на клонирование какого-либо гена, а именно:

1. Выделение ДНК из клеток интересующего организма (исходного) и выделение ДНК-вектора.

2. Разрезание (рестрикция) ДНК исходного организма на фрагменты, содержащие интересующие гены, с помощью одного из ферментов-рестриктаз и выделение этих генов из образованной рестрикционной смеси. Одновременно разрезают (рестрикциируют) векторную ДНК, превращая ее из кольцевой структуры в линейную.

3. Смыкание интересующего сегмента ДНК (гена) с ДНК вектора с целью получения гибридных молекул ДНК.

4. Введение гибридных молекул ДНК путем трансформации в какой-либо другой организм, например, в Е. coli или в соматические клетки.

5. Высев бактерий, в которые вводили гибридные молекулы ДНК, на питательные среды, позволяющие рост только клеток, содержащих гибридные молекулы ДНК.

6. Идентификация колоний, состоящих из бактерий, содержащих гибридные молекулы ДНК.

7. Выделение клонированной ДНК (клонированных генов) и ее характеристика, включая секвенирование азотистых оснований в клонированном фрагменте ДНК.

ДНК (исходная и векторная), ферменты, клетки, в которых клонируют ДНК — все это называют «инструментами» генной инженерии.


Рекомендуем к прочтению:

Химические мутагены
Предложено три классификации химических мутагенов: Рехборна, Фриза, Раппопорта. Фриз предложил разделить мутагены на две основные группы: 1) мутагены, реагирующие с нуклеиновой кислотой только во время ее репликации; 2) мутагены, вст ...

Черепно-мозговые нервы
Обонятельный-Обонятельный эпителий полости носа. Зрительный- Палочки и колбочки сетчатки. Глазодвигательный- Большинство наружных мышц глаза Гладкие мышцы радужной оболочки и хрусталика. Блоковый- Верхняя косая мышца глаза. Тройничный- Ко ...

Симпатический отдел автономной нервной системы, его центральная и периферическая части
Симпатическая часть вегетативной нервной системы — часть вегетативной нервной системы. Центральный отдел симпатической части располагается в боковых рогах спинного мозга. От него отходят волокна, иннервирующие непроизвольные мышцы внутрен ...