Выделение изотопно-меченных аминокислот из культуральной жидкости и гидролизатов биомассы метилотрофных бактерий.

Биология » Метилотрофные бактерии - источники изотопно-меченных Н-2 и С-13 аминокислот » Выделение изотопно-меченных аминокислот из культуральной жидкости и гидролизатов биомассы метилотрофных бактерий.

В ходе выполнения работы было проведено препаративное разделение аминокислот культуральной жидкости и гидролизатов биомассы метилотрофных бактерий методами обращенно-фазовой ВЭЖХ в виде бензилоксикарбонильных производных аминокислот. Так, дейтерий-меченный фенилаланин был выделен из культуральной жидкости В. methylicum методом обращённо-фазовой ВЭЖХ в виде Z-производного с хроматографической чистотой 99% и выходом 89%. Хроматографически чистые 2Н-и 13С-аминокислоты были выделены из гидролизатов биомассы B. methylicum и M. flagellatum в виде их Z-производных в миллиграммовых количествах [8]. Отдельные аминокислоты: фенилаланин и лейцин были также хроматографически выделены из культуральных жидкостей данных штаммов метилотрофных бактерий в виде метиловых эфиров дансил-аминокислот.

Ионнообменная хроматография аминокислот на колонке “Dowex” хорошо зарекомендовал себя как аналитический метод для изучения качественного и количественного состава белковых гидролизатов метилотрофных бактерий. Хроматограмма гидролизата суммарных белков B. methylicum, полученных при росте бактерий на среде, содержащей 98 об.% 2Н2О и 2 об.% С2Н3О2Н представлена на рис. 3. Как видно из рис.3, в этом гидролизате присутствуют 16 аминокислот. Поскольку пролин не детектируется в данных условиях его определяли при длине волны 440 нм.

Таким образом, проведённые исследования подтвердили эффективность использования метилотрофных бактерий для получения 2Н-и 13С- аминокислот. Предложенный подход предполагает комплексное использование метилотрофных бактерий, позволяя выделять аминокислоты как из культуральной жидкости после ферментации штаммов продуцентов, так и из гидролизатов суммарных белков биомассы.

О.V. MOSIN

Moscow State Academy of Fine Chemical Technology named after M.V. Lomonosov, 117571.

METHYLOTROPHIC BACTERIA - AS THE SOURCES OF ISOTOPICALLY LABELED 2H - AND 13C- AMINO ACIDS.

A possibility of using the various strains of methylotrophic bacteria for the preparation of amino acids labeled with stable isotopes 2Н и 13С, both secreted into culture medium and obtaining from protein hydrolysates is investigated. The data on adaptaition of L-phynylalanine producing strain of facultative methylotrophic bacteria Brevibacterium methylicum to growth media containing 2 v/v.% С2Н3О2Н and 98 v/v.% 2Н2О and biosynthesis of L-phenylalanine are presented. For L-leucine producing strain of obligate methylotrophic bacteria Methylobacillus flagellatum the cultivation was carried out on a medium containing the ordinary water and 1 v/v.% 13С1Н3ОН. The levels of 2Н- and 13С incorporation in amino acids were studied using the electron impact mass-spectrometry method of methyl esters of dansyl -and carbobenzoxychloride - derivatives of amino acids. The levels of 2Н- and 13C incorporation into amino acids while growing of methylotrophic bacteria on media containing 2 v/v CH3OH and 98 v/v.% 2Н2O, and 1 v/v.% 13CH3OH and 99 v/v. H2O were found to vary from 97,5% to 95%.


Рекомендуем к прочтению:

Классификация белков
Сложность строения белковых молекул, чрезвычайное разнообразие выполняемых ими функций затрудняют создание единой и четкой их классификации, хотя попытки сделать это предпринимались неоднократно, начиная с конца 19 века. Исходя из химичес ...

Сухое вещество, %
28,1±1,2 ...

Ответы кортикальных клеток после монокулярной депривации
И хотя ответы клеток ЛКТ после монокулярной депривации практически не изменялись, тем не менее большие изменения происходили в ответах кортикальных клеток. При регистрации электрической активности в зрительной коре было обнаружено очень м ...